四環(huán)素類抗生素的測定方法主要包括微生物抑制法、酶聯(lián)免疫法、分光光度法、毛細管電泳色譜法、薄層色譜法、高效液相色譜法、液相色譜-質譜法等。

  樣品經過提取和凈化后，四環(huán)素類抗生素可通過薄層色譜或液相色譜進行分離，再采用分光光度、熒光或質譜檢測系統(tǒng)進行定量測定。

  微生物法是一種傳統(tǒng)的測定四環(huán)素類化合物和其他抗生素的分析方法。微生物通常對四環(huán)素類抗生素具有固有的敏感性。操作簡便，價格低廉，不需要精密儀器和復雜的樣品前處理過程，因而適合大量樣品的篩選。

  間接酶聯(lián)免疫法可用來檢測牛奶中的四環(huán)素類抗生素。檢測限可達5 ng/g由于該方法所采用抗體與金霉素有強烈的交叉反應活性，因此，該法雖然不是用來檢測四環(huán)素類的，但對于金霉素的檢測限也低達5 ng/g。