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更新時間：2021-08-27
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“隔壁的實驗室又發了3篇SCI文章，我們還在處理數據，這幾家的試劑盒檢測數據怎么都不一樣？"小編每當聽到這句話，每次感受都不同。對那些努力鉆研數據的學者、那些把青春獻給實驗室的研究生們表示深深的同情。那么，造成試劑盒檢測數據不一樣的原因，除了一些實驗操作、實驗環境等客觀因素外，還有試劑盒質量參數，如重復率、板內差、板間差、線性稀釋、回收率等。但是，最重要的影響因素可能是作為檢測標尺的標準品。所以，下面我們就揭曉影響不同ELISA試劑盒檢測數據的差異和關于標準品的幾個疑惑。
不同的ELISA試劑盒如何進行校準？
國際標準物進行校準
目前，ELISA試劑盒校準方法為應用NIBSC/WHO推薦的標準品對試劑盒進行校準。
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高質量的原料進行校準
ELISA試劑盒的檢測指標種類可能遠遠多于NIBSC/WHO推薦的標準品，有時需要依靠高質量的ELISA試劑盒原料。目前，優質的進口原料（如重組蛋白作為標準品）依然是生產高質量ELISA試劑盒的前提條件之一，但是不同品牌的蛋白表達體系和質控標準不同，可能會導致原料的性能不同，進而造成檢測數據的差異。
嚴謹的生物樣本進行驗證
隨著國內生物技術的發展，自主研發蛋白表達、抗體制備、ELISA試劑盒開發技術也在不斷進步。除了應用NIBSC/WHO推薦的標準品對試劑盒進行校準外，也可用一些暫無相關機構認可的生物樣本進行驗證，按照科學研究方法，對種屬、性別、生命周期階段、種類等因素劃分所得到的生物樣本進行驗證。
生物樣本驗證ELISA試劑盒的試驗數據
重組蛋白-ELISA試劑盒標準品的選擇
目前，國內外的雙抗夾心法ELISA試劑盒的標準品大多數屬于重組蛋白，競爭法ELISA標準品更多樣化，有可能為重組蛋白也可能為化學合成物質。為什么天然蛋白不用于作為標準品？雙抗夾心法ELISA試劑盒選擇重組蛋白為標準品的主要原因：
第一，天然蛋白均存在于復雜的生物樣本中，大多數在細胞或組織中表達量可能較少，不能進行蛋白純化或者成本高昂，無法獲得大量的天然蛋白。
第二，ELISA試劑盒檢測基于抗體和抗原的特異性結合，在研究之初，通過重組蛋白進行免疫特定動物獲得特定的單克隆或者多克隆抗體，因此，抗體和免疫的抗原存在高親和力和高特異性。
第三，隨著蛋白表達技術的發展，重組蛋白和天然蛋白具有更高的相似度，特別是以酵母或細胞為代表的真核表達系統的發展，讓真核表達的重組蛋白具有更多的空間構象和生物活性。
ELISA試劑盒的標準品如何使用？
如果ELISA試劑盒的標準品是重組蛋白，請提前20-30分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫(18-25℃)，如果試劑盒需分多次使用，請僅取出本次實驗所需的酶標板條和試劑，剩余板條和試劑需按照要求條件保存。
標準品工作液的配制：將標準品的凍干粉末盡量集中到西林瓶或離心管底部，加入標準品/樣品稀釋液至凍干標準品中，室溫水平靜置10分鐘，讓重組蛋白恢復其空間構象，然后上下顛倒數次，待其充分溶解后，輕輕混勻，避免起泡，然后進行分裝和使用即可。
標準品的保存和棄用：如果1個月內使用，ELISA試劑盒標準品可以暫存于4℃；如果1個月以上不用，標準品必須保存于-20℃以下環境；已配制好的標準品工作液如有剩余液體請切記要棄用，標準品工作液一定要現配現用。
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