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更新時間：2025-08-05
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1. Q：競爭ELISA、雙抗夾心ELISA、間接ELISA都是什么？有什么區別？
A:
| 競爭ELISA | 雙抗夾心ELISA | 間接ELISA | |
| 特點 | 包被抗體，標記抗原，樣本中的抗原與酶標抗原競爭與固體抗體結合，標本中抗原量含量越多，結合在固相上的酶標抗原越少，最后的顯色也越淺。 | 使用兩個特異性單抗或者1個特異性單抗和1個特異性多抗，固相載體包被抗體，酶標記特異性抗體作為檢測抗體。 | 固相載體包被抗原，酶標記二抗，主要用于測抗體。 |
| 優點 | 可適用比較不純的樣本，而且數據再現性很高。 | 使用兩個特異性抗體檢測，特異性好。 | 使用酶標二抗增加了靈敏度，靈活度大，成本低。 |
| 缺點 | 整體的敏感性和專一性都較差。 | 成本高。 | 交叉反應幾率升高。 |
| 用途 | 小分子抗原或者半抗原的定量檢測，當抗原材料中干擾物質不易去除或不易得到足夠的純化抗原時，多用于此方法檢測；一般小分子激素及藥物常用此法測定。 | 用于抗原的定量檢測。 | 通過檢測血清中的抗體來檢測病毒，如第1，2代艾滋病診斷試劑。常用于免疫動物血清中抗體含量的測定。 |
2. Q：為什么推薦雙波長檢測（450nm和630nm）。
A：ELISA實驗終止后形成的是黃色物質，該物質需要在450nm處測定其吸光度，630nm的吸光度只是檢測板子本身的吸光度，與酶標板的材質有關，測OD630可以消除各個板孔不干凈等非特異性因素引起的誤差。如果所使用的酶標儀不可以檢測OD630也沒有關系，只讀取OD450的結果也可以。
數據處理時所用的矯正值，是把所有孔的OD值減去標準曲線0濃度孔的OD值，進一步計算結果。
3. Q：CV值指的是什么？
A：CV值是統計學中的一個概念，中文是變異系數，可以認為變異系數和極差、標準差和方差一樣，都是反映數據離散程度的絕對值。CV值越小，說明數據的波動程度越小。在描述板內、板間實驗結果是否一致時常用到CV值，其越小，說明批內及批間差越小，試劑盒質量越好。
4. Q：標曲擬合方式。
A：ELISA數據處理中所謂的“標準曲線"其實稱為擬合曲線比較合適。標準曲線的擬合方式有多種，直線、二次曲線、三次曲線、指數、對數等雖都可用于ELISA及其它生物學反應中的曲線擬合，但都只適用于曲線的一部分，有的適用于前半段，有的適用于后半段，有的適用于中間一段，而四參數Logistic曲線擬合則對曲線的全部都有較好的適用性。目前國際上流行的免疫檢測擬合方式是“四參數Logistic擬合"，用這種擬合方式往往能夠比較精確的反映濃度和吸光度的曲線關系，從而進一步比較正確地獲得樣品中待測物質的濃度值。
建議用專門的軟件進行數據處理，這樣可以快速、準確地計算出結果。
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