本篇文章詳細介紹了單層貼壁細胞總蛋白的提取方法和步驟，僅供參考。另外索萊寶公司提供細胞總蛋白提取試劑盒，更加方便老師和同學順利完成單層貼壁細胞總蛋白的提取實驗。

    1. 倒掉培養液，并將瓶倒扣在吸水紙上使吸水紙吸干培養液（或將瓶直立放置一會兒使殘余培養液流到瓶底然后再用移液器將其吸走）。

    2. 每瓶細胞加 3ml 4 ℃預冷的 PBS （ 0.01M pH7.2 ～ 7.3 ）。平放輕輕搖動 1min 洗滌細胞，然后棄去洗液。重復以上操作兩次，共洗細胞三次以洗去培養液。將 PBS 棄凈 后把培養瓶置于冰上。

    3. 配制裂解試劑，現用現 配制 按 1ml RIPA + 25 μ l PMSF （ 100mM ） +110 μ l Pi （ PhosSTOP 磷酸酶抑制劑），搖勻置于冰上。（ PMSF 要搖勻至無結晶時才可與裂解液混合。）

    4. 每瓶細胞加 100 μ l 的裂解液，用干凈的刮棒將細胞刮于培養瓶的一側（動作要快），于冰上裂解 30min ，為使細胞充分裂解培養瓶要經常來回搖動。

    5. 裂解完后，然后用槍將細胞碎片和裂解液移至 1.5ml 離心管中。（整個操作盡量在冰上進行）

    6. 于 4 ℃下 12000rpm 離心 15min 。（提前開離心機預冷）

    7. 將離心后的上清分裝轉移倒 0.6ml 的離心管中放于 -80 ℃保存。