嘌呤霉素
貨號：P8230
規格：25mg/100mg
英文名稱 : Puromycin 
CAS : 58-58-2 
分子式 : C22H29N7O5·2HCl 
分子量 : 544.43 
儲存條件 : -20℃ 
純度 : ≥98%(TLC) 
單位 : 支 
外觀（性狀） : 白色或白中帶有黃色的粉末

• 別名 : 二鹽酸嘌呤霉素；鹽酸鹽
• 危險代碼 : R:22

說明：蛋白質合成抑制劑。抑制細菌、藻類原生物和哺乳動物細胞生長。

     （Puromycin）是由白黑鏈霉菌（Streptomyces alboniger）發酵代謝產生的一種氨基糖苷類抗生素，通過抑制蛋白質合成而殺死革蘭氏陽性菌，各種動物和昆蟲細胞。某種特殊情況下有效作用大腸桿菌。作用機制在于是氨酰-tRNA分子3’末端的類似物，能夠與核糖體的A位點結合并摻入到延伸的肽鏈中。同A位點結合后，不會參與隨后的任何反應，從而導致蛋白質合成的提前終止并釋放出C-末端含有的不成熟多肽。

     產生菌Streptomyces alboniger內發現的pac基因編碼N-乙酰轉移酶（PAC），賦予機體對產生抗性。這一特性如今普遍應用于篩選特定攜帶pac基因質粒的哺乳動物穩定轉染細胞株。

    在細胞穩轉株篩選中的普遍應用與慢病毒載體的特性有關，現在商業化的慢病毒載體多數都攜帶pac基因。在某些特定情況下，亦可以用來篩選轉化攜帶pac基因質粒的大腸桿菌菌株。

     抗菌機理在于作用于細菌核糖體30S亞單位，抑制細菌蛋白質的合成而發揮抗菌作用；也可導致mRNA遺傳三連體密碼閱讀錯誤， 翻譯形成無意義的蛋白質；也可依靠離子吸附于菌體表面，造成細胞膜損傷。導致膜通透性增加，使胞內一些重要生命物質外漏，使細菌死亡。

   溶解性：溶于水，參考濃度50mg/ml。

使用方法

1.建議使用濃度

     哺乳動物細胞：1-10 μg/mL，佳濃度需要殺滅曲線來確定；

     大腸桿菌：LB瓊脂培養基篩選穩定轉化pac基因的大腸桿菌，使用濃度為125μg/mL。注：使用篩選大腸桿菌穩轉株需要的pH值調節，而且受宿主細胞本身的影響。

2.溶解方法

    用蒸餾水溶解配制成50 mg/ml的母液，經0.22 μm濾膜過濾除菌后分裝于-20℃凍存；也可溶于甲醇，配制成10 mg/ml的儲存液。

3. 殺滅曲線的確定（以shRNA轉染或者慢病毒轉導為例）

    有效篩選濃度跟細胞類型、生長狀態、細胞密度、細胞代謝情況及細胞所處細胞周期位置等有關。為了篩選到穩定表達的shRNA細胞株，確定殺死未轉染/轉導細胞的低濃度關重要。建議初次做實驗的客戶一定要建立適合自身實驗體系的殺死曲線（kill curve）。

    1） Day 1：24孔板內以5~8 x 104 cells/孔的密度鋪板，鋪足夠量的孔以進行后續的梯度實驗。37℃細胞孵育；

    2） Day 2：a）準備篩選培養基：含不同濃度的新鮮培養基（如0-15μg/mL，少5個梯度）；b）往孵育后的細胞內更換新鮮配制的篩選培養基；之后37℃孵育細胞；

   3） Day 4：更換新鮮的篩選培養基，并觀察細胞存活率。

   4） 根據細胞的生長狀態，約2-3天更換新鮮的篩選培養基；

   5） 每日監測細胞，觀察存活細胞率，從而確定抗生素篩選開始4-6天內有效殺死非轉染或者所有非轉導細胞的藥物低濃度。

4. 哺乳動物穩定轉染細胞株的篩選

    等轉染含有pac基因的質粒后，細胞在含有的培養基中增殖，以篩選出穩定轉染子。

    1）細胞轉染48h后，將細胞（原樣或稀釋）置于含有適當濃度的新鮮培養基中培養。

注意：當細胞處于活躍期時，抗生素作用明顯。細胞過于密集，抗生素產生的效力會明顯下降。好進行細胞分盤使其密度不超過25%。

    2）每隔2-3天，移除和更換含有的培養基。

    3）篩選7天后評估細胞形成的病灶。病灶可能需要額外的一周或者更多時間，這依賴于宿主細胞系和轉染篩選效率。注意：每日進行細胞生長狀態的觀察。的篩選少需要48h，有效濃度的篩選周期一般在3-10天。

    4）轉移和放置5-10個抗性克隆到一個35mm的培養皿中，用選擇培養基繼續培養7天。此次富集培養是為日后的細胞毒性實驗做準備。

注意事項

1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2）為有毒化合物，操作時請小心拿放。

Puromycin dihydrochloride hydrate
Catalog Number： P8230
Specifications
Purity:  ≥98%(TLC)
Physical Appearance: White to off-white powder
Storage
Desiccate at -20° C
Properties
Molecular Weight:  544.43
Molecular Formula:  C22H29N7O5·2HCl
Solubility: Soluble in water (50 mg/ml)
Product Description
Puromycin belongs to the amino-nucleoside family of antibiotics and is isolated from Streptomyces alboniger. Since the
partial structure of this antibiotic showed it to be a purine derivative, puromycin was assigned as its generic name.
Puromycin is a broad spectrum antibiotic and antibacterial agent. It is active against Gram-positive microorganisms,
less active against acid-fast bacilli, and weakly active against Gram-negative microorganisms.It acts very quickly and
can kill 99% of the cells within 2 days. It also exhibits antitumor activity in studies on brain tumor cells.
Puromycin is a protein synthesis inhibitor that causes premature chain termination by acting as an analog of the
3’-terminal end of aminoacyl-tRNA. It has been used to study transcriptional regulatory mechanisms that control the
sequential and coordinate expression of genes during cell differentiation.
Usage:
A stock solution of 10 mg/mL(in water ) should be sterilized by filtration through a 0.22um filter and stored frozen. It
is tested on HeLa cells for cell growth arrest and selection of cells after transfection of the pac resistance gene. Hela
cells were found to be resistant to a concentration of 0.1-0.3ug/ml and sensitive to a concentration in the range of 1-10
ug/ml.
For selection of pac-containing colonies after transfection it is better to use the antibiotic supplemented in the cell
medium 2 days after transfection, in the range of 1-6 ug/ml. Colonies will appear 7-10 days after transfection.
The optimal working concentration of puromycin varies between cell lines. Usually, the working concentration
for eukaryote cell culture is 1-10ug/ml.
Storage/Stability
Store the product at –20 °C. Under these conditions, the product remains active for two years.

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