gu氨酸合成酶（GOGAT）測試盒氮代謝

產(chǎn)品簡介：

gu氨酸合成酶（GOGAT）測試盒氮代謝
測定意義：GOGAT分布于植物中，和gu氨酰胺合成酶共同構成GS/GOGAT循環(huán)，參與氨同化的調(diào)控。
測定原理：GOGAT催化gu氨酰胺的氨基轉移到α-酮戊二酸，形成兩分子的gu氨酸；同時NADH氧化生成NAD+，340nm吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。

產(chǎn)品型號：BC0070-50T/48S

更新時間：2024-04-24

廠商性質：生產(chǎn)廠家

訪問量：1970

服務熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細胞酸性磷酸酶細胞堿性磷酸酶果膠系列轉氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

產(chǎn)品介紹

GU氨酸合成酶（GOGAT）活性檢測試劑盒說明書

紫外分光光度法

貨號：BC0070

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體60 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體60 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	粉劑×2支	2-8℃保存
試劑三	粉劑×2支	2-8℃保存
試劑四	粉劑×2支	-20℃保存

溶液的配制：

1、工作液的配制：取試劑二、試劑三、試劑四各一支加入30 mL試劑一中溶解，現(xiàn)用現(xiàn)配，可分裝后-20℃保存，避免反復凍融。

產(chǎn)品說明：

GOGAT主要存在于原核生物、酵母菌及高等植物非綠色組織的前質體中，和GU氨酰胺合成酶（GS）共同構成GS/GOGAT循環(huán)，參與氨同化的調(diào)控。

GOGAT以NADH為電子供體，催化GU氨酰胺的氨基轉移到α-酮戊二酸形成兩分子的GU氨酸，NADH在340nm吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

二、測定步驟

1、紫外分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、工作液提前配置，平衡至室溫。

3、樣本測定

試劑名稱（μL）	測定管
工作液	900
樣本	100

混勻，加樣本的同時開始計時，在340 nm波長下記錄20秒時的初始吸光度A1，比色后迅速將比色皿連同反應液一起放入25℃水浴或培養(yǎng)箱中準確反應5分鐘；迅速取出比色皿并擦干，340nm下比色，記錄5分20秒時的吸光度A2，計算ΔA=A1-A2。

三、GOGAT活性計算

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

GOGAT活性（U/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr

（2）按樣本質量計算：

單位的定義：每g組織每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個酶活力單位。

GOGAT活性（U/g 質量）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞數(shù)量計算：

單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個酶活力單位。

GOGAT活性（U/10⁴ cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.643×ΔA

V反總：反應體系總體積，10^-3L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×10³L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應時間，5min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬；10⁹：單位換算系數(shù)，1mol =10⁹nmol。

注意事項：

1、測定期間樣本在冰上放置，以免變性和失活。

2、最好兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結果的準確性。

3、當A1大于1.5或者ΔA大于0.6時，建議將樣本用蒸餾水稀釋后測定，當ΔA過小時，可以延長酶促反應時間（10min或15min）或者加大加入的樣本體積進行測量。

4、由于提取液中含有一定濃度的蛋白（約1mg/mL），所以在測定樣品蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量。

實驗實例：

1、取0.1g紅豆芽加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清后按照測定步驟操作，測得計算ΔA= A1-A2=1.23-1.067=0.163，按樣本質量計算酶活得：

GOGAT活性（U/g 質量）=321.5×ΔA÷W=321.5×0.163÷0.1=524 U/g 質量。

2、取0.1g稗草加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清后按照測定步驟操作，測得計算ΔA= A1-A2=1.416-1.404=0.012，按樣本質量計算酶活得：

GOGAT活性（U/g 質量）=321.5×ΔA÷W=321.5×0.012÷0.1=38.58 U/g 質量。

相關發(fā)表文獻：

[1] Fei Ding,Qiannan Hu,Meiling Wang,et al. Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants. International Journal of Molecular Sciences. December 2018;(IF4.183)

[2] Jie Wang,Wei Zhou,Hui Chen,et al. Ammonium Nitrogen Tolerant Chlorella Strain Screening and Its Damaging Effects on Photosynthesis. Frontier in Immunology. January 2019;(IF4.259)

[3] Meng L, Li W, Zhang S, et al. Effects of sucrose amendment on ammonia assimilation during sewage sludge composting[J]. Bioresource technology, 2016, 210: 160-166.

參考文獻：

[1] del Pilar Cordovilla M, Pérez J, Ligero F, et al. Partial purification and characterization of NADH-glutamate synthase from faba bean (Vicia faba) root nodules[J]. Plant science, 2000, 150(2): 121-128.

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