蛋白質電泳試劑PAGE凝膠銀染試劑盒
貨號: G7210
規格: 1L
保存: 室溫(15℃-25℃) 干燥保存，復檢期 12 個月。

注：1L 規格指可配制的硝酸銀染色液的體積，實際使用次數根據 PAGE 膠大小不同而不同。
 

產品簡介:
    核酸銀染的原理是銀離子可與核酸形成穩定的復合物，然后用還原劑如甲醛在堿性環境下使 Ag+還原成銀顆粒，可把核酸電泳帶染成黑褐色。它主要用于聚丙烯酰胺凝膠電泳染色。其靈敏度比 EB 高 200 倍，該產品整個過程只需要 20 分鐘，操作簡單，靈敏度高，能檢測到 10ng 以下的 DNA 條帶。

    聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺在加速劑N，N，N，N—四甲基乙二胺(簡稱TEMED)和催化劑過硫酸銨(簡稱AP)或核黃素(即vitamin B2)的作用下聚合交聯成三維網狀結構的凝膠，以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳
(polyacrylamide gel electrophoresis，簡稱PAGE)
    SDS－PAGE是在要電泳的樣品中加入含有SDS和β-巰基乙醇(或者DTT)的樣品處理液，SDS可以斷開分子內和分子間的氫鍵，破壞蛋白質分子的二級和三級結構，β-巰基乙醇可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵，破壞蛋白質的四級結構。SDS還與蛋白質結合使蛋白質－SDS復合物上帶有大量的負電荷，這時各種蛋白質分子本身的電荷*被SDS掩蓋。這樣電泳時，就消除了各種蛋白質本身電荷及結構上的差異，電泳速度只是與蛋白質分子量有關。用本法測定蛋白質的分子量只需根據待測蛋白質在已知分子量的標準蛋白質圖中的位置，就能得知分子量。
 

操作步驟:
一、染色液配制
    需要配制的染色液體積根據 PAGE 膠的大小而定，一般的 mini-PAGE 膠需要 20-30mL。配制用的器皿清洗干凈后用去離子水涮洗，染色液須用去離子水配制，現用現配。如果配制的溶液體積不是 100mL，可以按比例改變各成分用量。
    1，硝酸銀染液：稱取 0.2g 硝酸銀，加入到 90ml 去離子水中*溶解，加入 10ml 溶液 A 混勻，現用現配。
    2，顯色液：分別取溶液 B 和溶液 C 各 10ml 加入 80ml 去離子水中混勻，現用現配。
    3，終止液：取終止液 D 10ml 加去離子水稀釋 100ml，現用現配。
二、染色：
    1，PAGE 電泳結束后，將 PAGE 蛋白膠轉移玻璃平皿或搪瓷盤中，用去離子水漂洗兩遍，每次 2min。
    2，將 PAGE 膠轉移硝酸銀染液中，使染液沒過 PAGE 膠，室溫染色 10min?？芍糜趽u床上緩慢搖晃，使其染色均勻。
    3，棄去染色液，用去離子水快速漂洗三次，每次半分鐘。
    4，將 PAGE 膠轉移顯色液中，使顯色液沒過 PAGE 膠，室溫搖晃顯色條帶清晰可見。
    5，可選，將 PAGE 膠轉移終止液中，終止顯色 1min。
    6，銀染后 PAGE 膠可拍照保存或用于后續試驗。
 

注意事項 ：
    1.  銀染主要出現在 PAGE 膠的表面，使用薄膠（0.5-0.75mm）可以提高靈敏度。
    2.  對于考馬斯亮藍染色的 SDS-PAGE 膠，可用甲醇將膠漂洗后，繼續進行銀染。考染過程中的乙酸會干擾銀染，因此要確保將 PAGE 凝膠中殘留的乙酸*洗凈。
    3.  不同蛋白質對銀染的反應是不一樣的，尤其是堿性蛋白染色效果差。因此，不宜用銀染測定不同蛋白的比例。
    4.  染色過程中，緩慢的振蕩是必要的，一般選擇 40-60 rpm.
    5.  凝膠表面的裂紋多是由于壓力、手印及表面干燥所致，所以全程中都應帶手套操作。
    6.  PAGE 凝膠背景呈均一的黑色多是水中的雜質引起的，所以溶液的配制應使用電導率小于 1 µS 的去離子水。
    7.  如果染色后有呈灰塵或煙霧狀灰色或棕色的沉淀出現在凝膠表面，可能是在幾步漂洗過程中洗得不夠*，或是染色過程時溫度太低。
    8.  較深的銀染背景多是丙烯酰胺中的雜質所致。
    9.  PAGE 膠中的甘油、尿素、甘氨酸、Triton X-100 和兩性電解質這些物質會干擾銀染。
   10. 室溫操作時，溫度的波動往往會干擾銀染的效果，恒溫水浴可以解決這個問題。
   11. 憑借戊二醛預處理可以使各種蛋白質的染色提高 40 倍。
   12. 染色使用的玻璃器皿必須非常干凈，用酸浸泡可以滿足要求。
   13. 銀染應盡快照相，隨著時間延長，蛋白條帶會變淺，而背景會加深。
   14. 銀染容器理想的是玻璃平皿，其次是搪瓷盤和密胺塑料盤等。

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