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專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產(chǎn)品型號：BC5980-50T/48S
更新時間：2025-08-29
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：3023
010-50973130
產(chǎn)品分類
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丁酰膽*酯酶抑制劑活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號: BC5980
規(guī)格: 50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
試劑二 | 液體40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體35 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 粉劑×1瓶 | -20℃保存 |
試劑五 | 液體1 mL×1支 | -20℃保存 |
溶液的配制：
1. 試劑一：臨用前取1支試劑一，加入1.8mL蒸餾水，充分溶解，用不完的試劑-20℃分裝后可保存4周，避免反復凍融（該試劑為凍干試劑，可能存在不同瓶間肉眼觀察試劑量相差較大甚至量很少的現(xiàn)象，此現(xiàn)象不影響使用，實際質(zhì)量相同）。
2. 試劑四：臨用前加入17mL試劑二，充分溶解，用不完的試劑-20℃可分裝保存4周，避免反復凍融。
3. 試劑五：10mmol/L利凡斯的明溶液。臨用前取15μL 10mmol/L利凡斯的明溶液，加入985μL蒸餾水，配制成0.15mmol/L利凡斯的明溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配（此試劑用于陽性管實驗，選做）。
產(chǎn)品說明：
丁酰膽*酯酶（Butyrylcholinesterase，BchE，EC3.1.1.8），又稱血漿膽*酯酶，假性膽*酯酶，是一種絲*酸水解酶，由肝臟合成后進入血液，幾乎存在于所有動物組織中。與乙酰膽*酯酶（AchE）相比，BchE能夠有效水解較大的膽*酯，如丁酰膽*和苯甲酰膽*，而且可以清除有機磷類農(nóng)藥、氨基甲酸酯類農(nóng)藥等神經(jīng)毒劑的毒害作用。有研究表明，BchE可作為阿爾茨海默病治療的重要靶點，BchE抑制劑被用于改善阿爾茨海默病患者記憶力減退、認知功能障礙等病征。
BchE催化丁酰膽*水解生成膽*，膽*與二硫代硝基 苯甲酸（DTNB）作用生成5-巰基-硝基 苯甲酸（TNB），BchE抑制劑通過抑制BchE活性，減少丁酰膽*的水解。TNB在412nm處有吸收峰，可通過測定412nm處吸光度的變化，計算BchE抑制劑活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、天平、烘箱、粉碎儀/研缽/勻漿器、30-50目篩、超聲清洗儀、離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體的操作步驟請見“產(chǎn)品資料"文件
注意事項：
1. 為保證實驗結(jié)果的準確性和穩(wěn)定性，請嚴格控制反應時間和操作時間。
2. 樣本吸光度A’測定大于1.5或ΔA測定接近ΔA空白時，建議在樣本處理步驟增加組織樣本比例或?qū)⒎蹌颖九渲瞥筛邼舛鹊娜芤涸龠M行測定。當ΔA測定小于0.01時，可以將樣本用提取液稀釋后再進行測定。
3. 若用于比較不同試劑、提取物、藥物或組織對BchE的抑制程度，必須將試劑、提取物、藥物或組織勻漿配制成相同濃度進行比較。
實驗實例：
1. 取0.1005g柚果皮樣本（烘干），加入1mL提取液進行超聲提取，離心后取上清，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算：ΔA空白=（A’空白1-A空白1）-（A’空白2-A空白2）=（1.372-0.205）-（0.166-0.112）=1.113，ΔA測定=（A’測定-A測定）-（A’空白2-A空白2）=（1.117-0.485）-（0.166-0.112）=0.578，計算抑制率得：
BchE抑制劑抑制率（%）=（1.113-0.578）÷1.113×100%=48.068%。
2. 取0.1014g柿果皮樣本（烘干），加入1mL提取液進行超聲提取，離心后取上清，稀釋16倍后按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算：ΔA空白=（A’空白1-A空白1）-（A’空白2-A空白2）=（1.372-0.205）-（0.166-0.112）=1.113，ΔA測定=（A’測定-A測定）-（A’空白2-A空白2）=（0.706-0.149）-（0.166-0.112）=0.503，計算抑制率得：
BchE抑制劑抑制率（%）=（1.113-0.503）÷1.113×100%=54.807%。
3. 取50μL 0.15mmol/L利凡斯的明溶液，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算：ΔA空白=（A’空白1-A空白1）-（A’空白2-A空白2）=（1.372-0.205）-（0.166-0.112）=1.113，ΔA測定=（A’測定-A測定）-（A’空白2-A空白2）=（0.838-0.171）-（0.166-0.112）=0.613，計算抑制率得：
BchE抑制劑抑制率（%）=（1.113-0.613）÷1.113×100%=44.924%。
參考文獻：
[1] Ellman GL, Courtney KD, Andres V Jr. et al. A new and rapid colorimetric determination of acetylcholinesterase activity [J]. Biochemical Pharmacology, 1961, 7(2): 88-95.
[2] Noor Atatreh, Sara Al Rawashdah, Shaikha S Al Neyadi. et al. Discovery of new butyrylcholinesterase inhibitors via structure-based virtual screening [J]. Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry, 2019, 34(1): 1373-1379.
[3] Li Q, Chen Y, Xing S. et al. Highly Potent and Selective Butyrylcholinesterase Inhibitors for Cognitive Improvement and Neuroprotection [J]. Journal of Medicinal Chemistry, 2021, 64(10): 6856-6876.
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